6533b7d1fe1ef96bd125c6d9

RESEARCH PRODUCT

Cilvēka nātrija tauroholāta ko-transportējoša polipeptīda klonēšana un ekspresija zīdītāju šūnās

subject

description

Neskatoties uz to, ka ir izstrādāta droša un efektīva hepatīta B vakcīna, kā arī vesela rinda pret hepatīta B vīrusu (HBV) vērstu ķīmisku līdzekļu, pasaulē ir >350 miljonu hronisko HBV nēsātāju, no kuriem 1 miljons mirst katru gadu. Galvenais jaunu terapijas veidu izstrādāšanas kavēklis ir efektīvas HBV infekciju un replikāciju nodrošinošas in vitro modeļsistēmas trūkums. Pateicoties revolucionāram atklājumam par NTCP (sodium taurocholate cotransporting peptide) lomu HBV infekcijas procesā pašlaik tiek aktīvi izstrādātās jaunās HBV in vitro infekcijas modeļsistēmas. Mūsu darbā NTCP receptoru ekspresējošo šūnu iegūšanai tika izmantota efektīva Semliki Meža vīrusa (SFV) replikona ekspresijas sistēma. NTCP proteīna ērtai detekcijai tā C-galam tika pievienots zaļais fluorescentais proteīns (EGFP). Pielietojot gēnu inženierijas metodes tika izveidotas divas plazmīdu konstrukcijas pEF4 NTCP-EGFP un pSFV1/NTCP-EGFP, kas satur NTCP-EGFP gēnu. Lai pētītu NTCP ekspresiju, tā lokalizāciju un funkcionalitāti pēc attiecīgo konstrukciju ievadīšanās BHK-21 un HepG2 šūnās, tās analizēja ar imūnfluorescences metožu palīdzību. Parādīta efektīva NTCP-EGFP gēna ekspresija un NTCP-EGFP proteīna lokalizācija šūnu plazmas membrānā un to spēja saistīt HBV preS1 peptīdu.