6533b7dafe1ef96bd126db2c

RESEARCH PRODUCT

Tetrazola analīzes izmantošana orhideju un ziemciešu dzimtas augu sēklu dzīvotspējas noteikšanai

subject

description

Sēklu ar nediferencēto embriju (putekļveida) dzīvotspējas noteikšanu apgrūtina mazs sēklu izmērs un sēklu dīgšanas atkarība no simbiotiskajiem mikroorganismiem. Darba mērķis bija pielāgot tetrazola analīzes metodi dažādu sugu sēklu, ar nepilnīgi attīstīto embriju, dzīvotspējas noteikšanai. Atbilstoši darba mērķim, uzdevumi bija: noteikt atsevišķu orhideju dzimtas un ēriku dzimtas ziemciešu apakšdzimtas sugu augu sēklu dzīvotspēju ar tetrazolija hlorīda metodi, pārbaudīt saharozes ietekmi uz pārbau-dāmo sēklu metabolisma aktivāciju pirms tetrazolija testa veikšanas un noteikt sēklu dīgtspēju in vitro apstākļos. Sēklu dzīvotspējas pārbaudē tika izmantota tetrazolija hlo-rīda metode, kas pamatojas uz dzīvotspējīgo sēklu šūnu iekrāsošanos dehidrogenāzes enzīma darbības rezultātā. Pirms sēklu krāsošanas ar tetrazolija hlorīdu, tās dezinficēja, vienlaicīgi veicot sēklu ķīmisko skarifikācijiu, nātrija hipohlorīta (NaClO) šķīdumā ar vai bez iepriekšējās inkubēšanas saharozes šķīdumā. Lai pārbaudītu ķīmiskās skarifikā-cijas ietekmi uz testa rezultātiem, mainīja dezinficēšanas ilgumu. Lai noteiktu sēklu dīgstspēju in vitro apstākļos, izmantoja orhideju dzimtas sēklu diedzēšanai specializētu N1 barotni un Murashige & Skoog barotni, papildinātas ar rauga ekstraktu. Uz barot-nes sterilā vidē tika ievadītas skarificētas sēklas. Sēklas diedzēja tumsā +22 °C ar vai bez iepriekšējās inkubēšanas +5 °C temperatūrā. Sēklu aktivitāte tika noteikta vienu reizi nedēļā, 16 nedēļu garumā, uzskaitot no sēklām attīstījušos protokormus un atse-višķi izdalot protokormus, kuriem novēroja rizoīdu izveidošanos. Dzīvotspējīgo sēklu procentuālie daudzumi tika salīdzināti starp tetrazola testā iegūtajiem un uz barotnēm uzskaitīto protokormu skaitu. Eksperiemntējot ar rauga ekstrakta koncentrācijām, tika pārbaudīta tā koncentrācijas ietekme uz sēklu dīgšanu in vitro apstākļos.