6533b823fe1ef96bd127efb9

RESEARCH PRODUCT

Zymomonas mobilis dzelzi saturošā alkoholdehidrogenāzes izoenzīma loma oksidatīvajā stresā

subject

description

Darbā tika analizēta ūdeņraža peroksīda rezistence Z. mobilis mutantu celmos ar izmainītu elpošanas ķēdes darbību, izslēgtu ADH II un/vai katalāzi: Zm6-ndh, Zm6-ndh/pNDH, Zm6-adhB, Zm6-adhB-ndh, Zm6-cat, Zm6-adhB-cat, lai gūtu ieskatu par ADH II lomu ūdeņraža peroksīda izraisītajā stresā. Salīdzinot mutantu celmu augšanu pie dažādām H2O2 koncentrācijām konstatēts, ka visaugstāko izturību pret peroksīdu izrāda Zm6-adhB, Zm6-adhB-ndh celmi, kuriem bija ievērojami paaugstināta katalāzes aktivitāte. Katalāzes negatīvajiem celmiem Zm6-cat, Zm6-adhB-cat, kuriem katalāzes nav, bija ļoti zema peroksīda rezistence, bet starp abiem celmiem tā neatšķīrās. Tas liecināja ka katalāzes pieaugums ir izšķirošais faktors, kas nosaka Zm6-adhB un Zm6-adhB-ndh lielo rezistenci. Elpošanas ķēdes mutantiem Zm6-ndh un Zm6-ndh/pNDH savā starpā bija novērojamas izteiktas ūdeņraža peroksīda rezistences atšķirības. Zm6-ndh/pNDH bija izteikti jutīgāks pret peroksīdu. Tajā pašā laikā katalāzes un ADH II aktivitātes abiem celmiem bija līdzīgas, bet atšķirības bija elpošanas ķēdes aktivitātē. Zm6- ndh elpošanas ķēdes aktivitāti nenovēroja, savukārt Zm6-ndh/pNDH elpošanas ķēde bija aktīvāka par izejas celmu Zm6. Tika konstatēts ka pievienojot ūdeņraža peroksīdu milimolārā koncentrāciju diapazonā netiek inducēta katalāzes ekspresija nevienā no Z. mobilis celmiem. Izvērtējot ADH II aktivitātes izmaiņas permeabililzētās šūnās pēc H2O2 pievienošanas atkarībā no vidē iepriekš pievienota NADH vai NAD+. NADH pievienošanas gadījumā ADH II aktivitāte saglabājās ilgāk. Tika izvirzīta hipotēze ka atšķirības peroksīda rezistencē starp Zm6-ndh/pNDH celmiem ir skaidrojamas ar atšķirībām elpošanas ķēdes aktivitātē, jo Zm6-ndh/pNDH celmam elpošanas ķēde vairāk konkurē par NADH un samazina NADH pieejamību ADH II.