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Borreliosis de Lyme: estudio de posibles vectores ixódidos y evaluación de métodos de diagnóstico microbiológico

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Zoonosis causada por bacterias del género Borrelia. por la transmisiónaccidental por garrapatas infectadas. El género Borrelia. pertenece a la familiaSpirochateaceae, y son 4 las causales de la borreliosis de Lyme, asociadas en elcomplejo Borrelia burgdorferi sensu lato ( B. burgdorferi sensu stricto,B. afzelii, B.garinii y B. Valaisiana) La adherencia de 48 horas es el mínimo exigido, para lainoculación de Borrelia burgdorferi sensu latoDiagnóstico de borreliosis de Lyme: Diagnóstico directo a partir dediferentes muestras clínicas al observarse fácilmente empleando colorantesconvencionales, Cultivo enmedio de BSK, técnicas de amplificación y la detecciónmediante sondas de ADN específico.En el diagnóstico indirecto se emplean como métodos de referencia, elenzimoinmunoanálisis como prueba de cribado y la inmunotransferencia para laconfirmación.Objetivos:1.- Obtener y caracterizar ixódidos procedentes de distintas áreas de laprovincia de Valencia.2.- Determinar la presencia de Borrelia burgdorferi sensu lato en los ixódidosobtenidos.3.- Seleccionar muestras clínicas con resultado en la prueba de cribado EIApositivo.4.- Analizar dichas muestras mediante otras pruebas específicas yconfirmatorias así como evaluar la presencia de reactividad cruzada con otros procesosnosológicos.5.- Estudiar las características clínicas y evolución de los pacientes conmarcadores serológicos sugestivos de borreliosis de Lyme así como evaluar susignificación.Materiales y métodos. Obtención y caracterización de ixódidos, se procedió ala detección de Borrelia burgdorferi mediante estudio microscopico, cultivo y PCR. Laselección de muestras clínicas, se realizó mediante el método de cribado EIA, y elestudio de reactividad cruzada y su confirmación mediante pruebas específicas. Y porúltimo, se realizó el análisis de signos y síntomas clínicos y su relación con lasresultados serológicos. Se realizaron macerados y disecciones a los que se practicó unestudio microscópico y cultivo en BSK II.Ya en el 2º periodo, se procedió a la detección de B. Burgdorferi mediantetécnicas de PCR. anidado, utilizando 2 parejas de iniciadores del gen de Osp A, segúnel método de Guttman y colaboradores, que permiten obtener en la 2ª amplificación,un fragmento de 345 pares de bases. Para el gen de la flagelina, utilizamos igualmene2 parejas de iniciadores del gen de la flagelina, según el método de Lebech ycolaboradores. que permiten obtener en la 2ª amplificación, un fragmento de 275pares de bases. Para el estudio serológico, se utilizó en primer lugar un método decribado EIA IgM-IgG Sistema VIDAS LYT (de bioMèrieux) y un métodocomplementario IFI Lyme Spot (también de bioMèrieux) que determina anticuerpos declase IgM e IgG por separado. Como método confirmatorio, se utilizó lainmunotransferencia B. burgdorferi cepa B31 (de MarDx Diagnostic) y · B. gariniigenogrupo 2 (de Gull Laboratories). La reactividad serológica cruzada, se llevó a cabofrente a Treponema pallidum, Coxiella burnetii, Rickettsia conori y Brucella mellitensis,virus de Epstein-Barr, Citomegalovirus y virus de la inmunodeficiencia humana. Lapoblación de pacientes se correspondió con los atendidos en el área del HGUVConclusiones:1.-La colección e identificación de garrapatas ixódidas procedentes dediferentes áreas de la provincia de Valencia, ha revelado la existencia de cincogéneros, con siete especies distintas. Ninguno de ellos, clasificado como Ixodes ricinus,reconocido principal vector de la borreliosis de Lyme.2.-En ninguna de las garrapatas estudiadas se ha identificado una espiroquetacompatible con Borrelia burdorferi sl. u otra especie de Borrelia asociada a un cuadrode borreliosis de Lyme.3.-Consideramos que el método más adecuado para el estudio microbiológicoen los ixódidos, es la disección de las garrapatas con extracción de sus estructurasglandulares e intestinos medios. El uso de ejemplares macerados para detección pormétodos moleculares es desaconsejado por la probable inhibición de la amplificacióndel ADN específico.4.-El método de enzimoinmunoanálisis como prueba de cribado, selecciona unapoblación de pacientes con características clínicas muy variables, pero también ungrupo de pacientes con manifestaciones características y con una concreta evoluciónclínica, que sustentan la existencia de casos probables de borreliosis de Lyme.5.-La titulación de los anticuerpos específicos de clase IgM e IgG medianteinmunofluorescencia y los criterios establecidos para la interpretación de las pruebasconfirmatorias de inmunotransferencia con antígenos de B. burgdorferi y B. garinii, semuestran escasamente rentables en nuestro medio, ya que no permiten confirmar nidescartar la existencia de la enfermedad en el grupo de pacientes estudiados.Todo lo cual nos permite considerar la necesidad de un mejor estudioepidemiológico y clínico de los casos sospechosos de borreliosis de Lyme, yparticularmente el desarrollo de criterios de diagnóstico microbiológico que se adecuenal perfil de la enfermedad en nuestra área.