6533b824fe1ef96bd1280ece

RESEARCH PRODUCT

N-galā ieviestas hemaglutinīna iezīmes ietekme uz melanokortīnu receptoru daudzumu šūnas membrānā

subject

description

Darbā tika veikta ar hemaglutinīna (HA) iezīmi N-galā un zaļo fluorescento proteīnu (GFP) C- galā sajūgtu melanokortīna 2. tipa (MC2R) un 4. tipa (MC4R) sekvenču kodējošu ekspresijas plazmīdu izveide. Jauniegūtajiem receptoriem tika noteikta funkcionālā aktivitāte CHO (Chinese Hamster Ovary cells) šūnās, lai pārliecinātos par to atbilstību izmantošanai receptoru šūnu virsmas ekspresijas mērījumos. Darba mērķis bija izmantot šos receptorus, lai pārbaudītu HA iezīmes un GFP ietekmi uz receptoru CHO virsmas ekspresiju, izmantojot konfokālo lāzerskenējošo mikroskopiju un imunofluorescento testu attiecīgi. Darbā tehnisku sarežģījumu dēļ netika pārbaudīta GFP ietekme, bet novērotā HA ietekme mazina iespēju, ka tāda eksistē. Tika noteikts, ka HA iezīme statistiski būtiski paaugstina MC2R šūnas virsmas ekspresiju, kamēr MC4R ekspresiju tā neietekmē. HA iezīmes ietekme uz MC2R virsmas ekspresiju pārsniedz tā palīgproteīna MRAP ietekme. Hemaglutinīna iezīmes ieviešana rada artifaktu, jo abnormāli paaugstina MC2R daudzumu membrānā, šajā gadījumā to nevar izmantot, lai raksturotu šo parametru kā normālos apstākļos esošu. Metodes receptoru daudzuma mērīšanai ar peptīdu iezīmes ieviešanu nepieciešams validēt ar citām metodēm.