6533b82cfe1ef96bd128ef63

RESEARCH PRODUCT

Clostridium perfringens identificēšana un uzskaitīšana dzeramajā ūdenī ar fluorescentās in situ hibridizācijas metodi

subject

description

Sporu-veidojošā C. perfringens ir nozīmīgs organisms ūdens vidē, ko izmanto kā indikatororganismu dzeramā ūdens kvalitātes noteikšanai. Turklāt šī baktērija un tās sporas ir noderīgas, lai brīdinātu par citu stresa rezistento patogēnu iespējamo klātbūtni dzeramajā ūdenī. Atbilstoši Ministru kabineta noteikumiem Nr. 235, Clostridium perfringens noteikšanai un uzskaitei jāizmanto membrānfiltrācija un tālāka mikroorganismu kultivēšana. Tomēr izpētīts, ka kultivēšanas metodes nespēj identificēt ūdenī esošus nekultivējamus bet dzīvotspējīgus mikroorganismus (VBNC). Fluorescentā in situ hibridizācija (FISH), nodrošina baktēriju identificēšanu to dabiskā vidē, un var būt izmantojama, ka alternatīvā metode. Taču standarta FISH protokols nav piemērots baktēriju sporu identificēšanai. Tas ir skaidrojams ar to, ka C. perfringens sporas ir ļoti izturīgas pret dažādiem nelabvēlīgiem apstākļiem, to starp dezinfekciju, UV apstarošanu, ķīmisko vielu apstrādi, kā arī pret dažādām caurlaidību pastiprinošām procedūrām. Līdz ar to C. perfringens sporas var ilgstoši saglabāties ūdens apgādes sistēmā neidentificētas. Šajā pētījumā izstrādātais permeabilizācijas protokols, kur sporas jāinkubē 30 minūtes (70˚C) 5% nātrija dodecilsulfāta un 50 mM detiotreitola maisījumā, ar tālāko 15 minūtes (37˚C) 10 mg/ ml vai 20 mg/ ml lizocīma apstrādi, palielināja C. perfringens sporu fluorescences intensitāti deviņas reizes, kur sporu fluorescence sasniedza 1800 RLU. Apvienojot izstrādāto permeabilizācijas protokolu ar Fluorescento in situ hibridizāciju, arī dabiskajos paraugos bija iespējams identificēt Clostridium perfringens veģetatīvas šūnas un sporas ar fluorescences intensitāti virs 1000 RLU.