6533b833fe1ef96bd129bb9e

RESEARCH PRODUCT

Jaunu ģenētisko variantu funkcionāla raksturošana izmantojot izolētas pacientu šūnas

subject

description

Mutācijas gan mitohondriālajā DNS, gan kodola DNS var izraisīt traucējumus mitohondriju oksidatīvās fosforilēšanas sistēmā, kas var būt cēlonis smagām mitohondriālajām slimībām. Mitohondriālo slimību diagnostika ir komplicēta, un tai izmanto lielu laboratorijas metožu klāstu. Darba “JAUNU ĢENĒTISKO VARIANTU FUNKCIONĀLA RAKSTUROŠANA IZMANTOJOT IZOLĒTAS PACIENTU ŠŪNAS” mērķis ir raksturot jaunus ģenētiskos variantus reto ģenētisko slimību pacientiem, izmantojot molekulārās un bioķīmiskās metodes, kā arī perifēros leikocītus un kultivētus fibroblastus. Tika veikta DNS variantu validācija ar Sangera sekvencēšanu, šūnu līniju izveidošana un kultivēšana, mitohondriju izdalīšana no šūnu kultūrām un perifērajiem leikocītiem, proteīnu koncentrācijas noteikšana, oksidatīvās fosforilēšanas (OXPHOS) sistēmas enzīmu aktivitātes mērījumi, šūnu dzīvotspējas noteikšana, kā arī imūnblotēšana. Vienam pacientam tika apstiprināta HPDL gēna varianta klātbūtne, kas saistīta ar mitohondriālajām saslimšanām. Otram pacientam tika apstiprināti divi PTCD3 gēna varianti. Tika noteikta šī pacienta un viņa ģimenes locekļu, kā arī kontroles grupas OXPHOS sistēmas enzimātiskā aktivitāte fibroblastos, kā arī pētīta varianta ietekme uz PTCD3 proteīna daudzumu mitohondrijos un šūnu dzīvotspēju.