6533b857fe1ef96bd12b4973

RESEARCH PRODUCT

Modificētas Lopbarības pupiņas raibuma vīrusam līdzīgās daļiņas vakcīnu konstruēšanai

subject

description

Maģistra darba mērķis ir izveidot CCMV CP VLP konstrukcijas E.coli, kas paredzētas efektīvākai ķīmisko epitopu pievienošanai uz VLP virsmas un lielākai daļiņu stabilitātei. Maģistra darbs izstrādāts no 2016. gada septembra līdz 2018. gada maijam Latvijas Biomedicīnas pētījumu un studiju centrā, Augu virisoloģijas laboratorijā Dr. biol. Andra Zeltiņa un Dr. biol. Inas Baļķes vadībā. Pētījuma objekts ir lopbarības pupiņas raibumu vīruss – CCMV. Maģistra darba laikā tika izveidotas divpadsmit CCMV CP ekspresijas konstrukcijas – pET42-CCMV-G3SKG3, pET4-CCMV-G3SKG3-Ntt830, pET42-CCMV-G3SKG3-Ctt830, pET42-CCMV-SS, pET42-CCMV-Ntt830-SS, pET42-CCMV-Ctt830-SS, pET42-∆24CCMV-SS, pET42-∆24CCMV-Ntt830-SS, pET42-∆24CCMV-Ctt830-SS, pET42-CCMV-G3SKG3-SS, pET42-CCMV-G3SKG3-Ntt830-SS, pET42-CCMV-G3SKG3-Ctt830-SS. Ekspresijas pārbaudes analīze uzrādīja, ka visi CP varianti ekspresējas E.coli un ir šķīstoši. CCMV-G3SKG3, CCMV-G3SKG3-Ntt830, CCMV-SS, CCMV-Ntt830-SS, ∆24CCMV-SS, CCMV-G3SKG3-SS, CCMV-G3SKG3-Ntt830-SS veidoja T=3 simetrijas VLP, taču CCMV-Ctt830-SS veidoja filamentozas daļiņas. Stabilitātes eksperimenti liecināja, ka visstabilākā konstrukcija ir CCMV-G3SKG3-SS, kas uzglabāta 15 mM KHPO4 pH 5.5 un 0.25M NaCl buferī, kā arī SS konstrukcijas ir izturīgākas pret lielākām sāls koncentrācijām. CCMV-wt, CCMV-Ntt830, CCMV-SS, CCMV-Ntt830-SS, izjaucot un savācot ar oligonukleotīdu G-10, pie mazākas G-10 koncentrācijas veido filamentozas daļiņas, taču pie lielākas formējas ikozahederālās daļiņās. CCMV-G3SKG3-SS var izmantot ķīmiskai epitopu pievienošanai uz VLP virsmas ieviestajam lizīnam. Atslēgas vārdi: lopbarības pupiņas raibumu vīruss, apvalka proteīns, tetanusa toksīns, VLP, sāls stabils, G-10