6533b870fe1ef96bd12cec0e

RESEARCH PRODUCT

Gripas vīrusa hemaglutinīna peptīdu attīrīšana, strukturālā izpēte un imunoloģiskās īpašības

subject

description

Gripas vīrusa mažorais virsmas antigēns hemaglutinīns (HA) ir primārais vīrusa neitralizējošo antivielu mērķis. HA stiebrs jeb stalks ir strukturāli konservatīvs proteīna domēns, kas šobrīd raisa plašu interesi kā potenciāls universālas gripas vakcīnas kandidāts. Darba ietvaros tika analizēti divu HA apakštipu (H1 un H3) stalka peptīdi, kas savstarpēji pārklājas C galā, – 57 aminoskābju garais peptīds 1 un N-galā pagarinātais 72 aminoskābju garais peptīds 2. Darbā tika veikta stalka peptīdu ekspresija, attīrīšana un kristalizācija. Analizējot H1 peptīda 1 kristālstruktūru, tika noteikts, ka apstākļos pie pH 6,7 tas ir trimērs, kura konformācija atbilst pilna garuma HA post-fusion struktūrai. Attīrītie peptīdu trimēri tika tālāk izmantoti peļu imunizācijai. Imūnfermentatīvā analīze ar vakcinētu peļu asins serumu atklāja, ka imunizācija ar H1 un H3 peptīdu 1 un H3 peptīdu 2 nespēj izsaukt krosreaktīvu HA specifisku antivielu atbildi, savukārt H1 peptīda 2 vakcīnas gadījumā novēroja serokonversiju arī pret heterologo H3 peptīdu 2. Atšķirībā no H1 peptīda 1, peptīds 2 nodrošināja daļēju protekciju pret homologa H1N1 gripas vīrusa infekciju, kas liecina par tā N-gala pagarinājuma lomu imūnās atbildes inducēšanā. Tālāk tika optimizēti apstākļi stalka peptīdu 2 ķīmiskai piesaistei pie fāga Qβ vīrusiem līdzīgajām daļiņām. Peļu imunizācija ar šādām himērām daļiņām inducēja spēcīgu krosreaktīvu antivielu atbildi gan pret 1., gan pret 2. grupas gripas vīrusu HA, taču nespēja būtiski labāk aizsargāt pret gripas vīrusa infekciju kā peptīdu vakcīnas. Kopumā H1 peptīds 2 uzskatāms par perspektīvu vakcīnas kandidātu, tomēr nepieciešami turpmāki eksperimenti, lai nodrošinātu pilnīgu protekciju pret gripas vīrusa infekciju.