6533b871fe1ef96bd12d145f

RESEARCH PRODUCT

Jaunu Staphylococcus Epidermidis sortāzes A inhibitoru atlase izmantojot FRET skrīninga sistēmu

Svjatoslavs Kistkins

subject

antibakteriālā rezistenceStaphylococcus epidermidissortāze AFRET skenēšanaaugstas caurlaidpējas skrīningsMedicīna

description

Pētījuma mērķis ir atrast jaunus zāļu kandidātus, kuri spēj inhibēt Staphylococcus epidermidis sortāzi A, vienlaicīgi mazinot patogēnu multirezistēnces izplatīšanos. Šim mērķim tika izveidoti ģenētiski DNS konstrukti, kuri kodē S.epidermidis sortāzes A katalītisko domēnu, iebūvējot pET22b un pET28a vektoros srtA gēnu. Rekombinantā sortāzes proteīna sintēze tika inducēta ar IPTG, izmantojot BL21(DE3) celmu Escherichia coli ekspresijas sistēmā. Proteīns bez papildus heksahistidīna sekvences (pET22b vektors) tika attīrīts ar anjonapmaiņas hromatogrāfijas kolonnām, savukārt heksahistidīna sekvenci saturošā sortāze (pET28a vektors) tika attīrīta izmantojot metāla afīno un gelfiltrācijas hromatogrāfiju. Enzīma aktivitāte un inhibitoru potence tika analizēta ar FRET analīzi, izmantojot Abz-LPETG- K-(DPN) un Dabcyl-LPETG-Edans fluorescenti iezīmetos peptīdus. Pavisam tika izanalizēti 1600 savienojumi, no kuriem 23 demonstrēja 50% vai lielaku relatīvo Se- SrtA inhibīšanu. Savukārt pēc sekundāras atlases tikai 15 savienojumi uzrādīja >50% relatīvo enzīma inhibēšanu. No šīs atlasītās inhibitoru grupas tālākiem pētījumiem tika atlasīti 4 savienojumi, kuri uzrādīja vislielāko relatīvo rezistenci. Darba turpinājumā ir paredzēti tādi tālāki izmeklējumi kā KMR, citotoksicitātes un šūnu invāzijas testi, lai varētu pāriet uz preklīniskiem pētījumiem in vivo līmenī.

yearjournalcountryeditionlanguage
2020-01-01
https://dspace.lu.lv/dspace/handle/7/52061