6533b7d0fe1ef96bd1259c05

RESEARCH PRODUCT

Gly-Pro-4-DIMETHYLAMINOANILIDE - SYNTHESIS AND APPLICATION FOR DIPEPTIDYL AMINOPEPTIDASE IV ACTIVITY DETERMINATION

subject

description

W pracy przedstawiono syntezę substratu dla diaminopeptydazy IV (DAP IV; EC 3.4.14.5). Substratem tym jest Gly-Pro-4-dimetyloaminoanilid (Gly-Pro-DMAA). W wyniku prowadzonej hydrolizy enzymatycznej, diaminopeptydaza IV uwalnia z Gly-Pro-4- dimetyloaminoanilidu jako substratu 4-dimetyloaminoanilin~(DMAA). Ilość uwolnionej DMAA określa aktywność enzymu. W celu oznaczenia ilości DMAA przeprowadzono ją w barwną pochodną chinonoiminową, którą można oznaczyć metodą spektrofotometryczną. Jako subtrat do tej reakcji wybrano kwas 1-hydroksy-2-naftoesowy, natomiast utleniaczem był heksacyjanożelazian (lll) potasu. W wyniku reakcji otrzymano barwnik niebieski 0 maksimum absorpcji przy długości fali 601 nm. Molowy współczynnik absorpcji otrzymanego barwnika i wartości parametrów kinetycznych reakcji enzymatycznej pozwalają wnioskować, że proponowany nowy subtrat, czyli Gly-Pro-DMAA, daje równie dobre możliwosci oznaczania aktywności enzymu DAP IV, co powszechnie dotychczas stosowany subtrat Gly-Pro-B-naftyloamid. Zaleta nowego subtratu jest możliwość uniknięcia kancerogennej B-naftyloaminy. Ze względów praktycznych również preferowany jest Gly-Pro-DMAA, gdyż sposób prowadzenia reakcji barwnej jest mniej czasochłonny, wymaga mniejszej ilości i tańszych odczynników oraz nie wymaga kontroli czasu.