6533b834fe1ef96bd129e49c
RESEARCH PRODUCT
Jauna pieeja audzēju antigēnu mikročipu izgatavošanā
Edgars Endzeliņšsubject
Bioloģijadescription
Ļaundabīgo audzēju antigēnu mikročipu tehnoloģija paver jaunas iespējas izstrādāt uz autoantivielu noteikšanu balstītus neinvazīvus vēža skrīninga un/vai diagnostikas testus. Līdz šim mūsu laboratorijā projekta "Seroloģiska ļaundabīgo audzēju diagnostikas testa izstrādāšana" ietvaros tika izstrādāti un testēti T7 fāgu displeja audzēju antigēnu mikročipi, kuru galvenos trūkumus raksturo tas, ka rekombinanto proteīnu skaits T7 fāga kapsīdā ir ļoti variabls, kā arī T7 fāga proteīnu klātbūtne var dot viltus pozitīvus signālus, ja testējamais serums satur augsta titra antivielas pret T7 fāgu vai E. coli antigēniem. Bakalaura darba mērķis bija izstrādāt jaunu pieeju antigēnu mikročipu konstruēšanā, kas ļautu uz čipa printēt no T7 displeja vektora nošķeltus tīrus antigēnus ar Strep-II-Tag iezīmi C galā, kam vajadzētu padarīt šos antigēnus viegli attīrāmus un kvantitējamus. Bakalaura darba ietvaros uz Strep-II-Tag iezīmi saturoša T7 vektora bāzes tika konstruēts T7 displeja vektors ar 3C proteāzes šķelšanas saita insertu. Šajā vektorā klonējot 12 dažādu audzēju antigēnu kDNS fragmentus, tika izveidots rekombinato fāgu panelis, kas tālāk tika izmantots gan rekombinato proteīnu šķelšanas metodikas izstrādāšanai, gan rekombinato fāgu – antigēnu mikročipu izgatavošanai. Imunoblota un mikročipu analīzes parādīja, ka fāgi uz savas virsmas ekspresē attiecīgos audzēju antigēnus ar Strep-II-Tag iezīmi, 3C proteāze ar augstu efektivitāti atšķeļ rekombinantos proteīnus, tomēr atšķeltie antigēni nebija detektējami ar StrepMAB antivielām pret C gala Strep-II-Tag iezīmi. Mikročipu testi liecināja, ka 3C proteāze degradē vai modificē Strep-II-Tag iezīmi, kā rezultātā antigēni nevar tikt attīrīti ar Strep-Taktīna kolonnu vai atpazīti ar antivielām pret Strep-II-Tag. Bakalaura darbs tika izstrādāts Latvijas Biomedicīnas pētījumu un studiju centrā vēža molekulārās ģenētikas darba grupā, grupas vadītājas Dr. biol. Aijas Linē vadībā laikā no 2008. līdz 2009. gadam, 5. un 6. studiju semestrī. Atslēgvārdi: 3C proteāze, audzēju antigēni, ļaundabīgie audzēji, proteīnu mikročipi, T7 vektors
year | journal | country | edition | language |
---|---|---|---|---|
2009-01-01 |