6533b838fe1ef96bd12a4b21

RESEARCH PRODUCT

Glicerīna cikla ietekme uz maizes rauga šūnu fenotipu

Reinis Vangravs

subject

glicerīna metabolismsglutationsNADPH/NADPSaccharomyces cerevisiaeoksidatīvais stressBioloģija

description

Šī darba mērķis bija novērtēt redoks kofaktora NADPH inženierijas mēģinājuma ietekmi uz rekombinantu Saccharomyces cerevisiae celmu fenotipu eksponenciālās augšanas laikā. Šajos CEN.PK2-1C rekombinantajos celmos tika ekspresēta NADP+ atkarīga glicerīna dehidrogenāze (Gld2p) ar mērķi atgriezt daļu glicerīna glikolīzē, kombinācijā ar glutationa antioksidatīvās sistēmas un NADPH kofaktora reģenerāciju. Rekombinantajiem celmiem tika noteikta subletālo stresu noturība, NADPH/NADP+ kofaktora un GSH/GSSG savstarpējās relatīvās attiecības, izmantojot spektrofotometriju un fluorometriju, kā arī rekombinantu augšanas dinamika ar ksilozi kā vienīgo oglekļa avotu. Darbā novērots, ka izveidotais „glicerīna cikls” nenoved pie vēlamā, stresa izturīgā fenotipa rašanās. Netika novērota paaugstināta NADPH un reducētā glutationa sintēze. Netika novērotas arī būtiskas izmaiņas augšanas ātrumā un dinamikā. Oksidatīvā stresa testi norāda uz iespējamu raugu citozīna deamināzes (Fcy1p) nozīmi pie stresa noturības. Stresa noturības kontekstā, ievērojamākais efekts tika panākts celmos ar izslēgtu ade8 gēnu. Veiktās modifikācijas neietekmē ksilozes metabolismu rekombinantajos celmos. Iegūtie in vivo rezultāti apstiprina termodinamiskos aprēķinus par reakcijas glicerīns – dihidroksiacetons nepieciešamajiem nosacījumiem. Lai gan šī reakcija norit in vitro pH > 8,8, šūnā esošā fizioloģiskajā pH dominē pretējā reakcija.

https://dspace.lu.lv/dspace/handle/7/35196