6533b854fe1ef96bd12af2bd

RESEARCH PRODUCT

Chemie an starren Grenzflächen, 10. Kinetisches Verhalten einiger an „Isothiocyanato-Aerosil” immobilisierter Esterasen – Analogversuche mit Insulin

subject

description

Amino-Aerosil wird mit Thiophosgen nach Gl. (1) in Isothiocyanato-Aerosil 2 (NCS-Aerosil) ubergefuhrt. Trypsin, Cholinesterase und Acetylcholinesterase werden an 2 nach Gl. (2) immobilisiert. Die Aktivitat der immobilisierten Esterasen wird untersucht auf (a) Lagerstabilitat, (b) Temperaturbestandigkeit und (c) pH-Abhangigkeit. Das kinetische Verhalten der immobilisierten Enzyme wird verglichen mit dem der freien, aber mit n-Butylisothiocyanat behandelten Esterasen. Am Beispiel der Cholinesterase, die uber unterschiedliche Ankergruppen mit Aerosil verknupft wurde, wird der Einflus unterschiedlicher Spacergruppen auf die Hydrolysegeschwindigkeit studiert. Aerosile, die mit Acetylcholin-Analogen nach Gl. (3) kovalent verknupft sind, reagieren mit homogen geloster Acetylcholinesterase mit unterschiedlichen Geschwindigkeiten. Insulin, das an NCS-Aerosil immobilisiert wurde, ist nach subcutaner Verabreichung pharmakologisch inaktiv. Durch Reduktionsversuche in Verbindung mit der SH-Gruppen-Bestimmung nach Ellman konnte nicht entschieden werden, ob Insulin uber die A-oder B-Kette mit Aerosil verknupft ist. Chemistry on Rigid Interfaces, 10. – Kinetic Behavior of Some Esterases Immobilized with Isothiocyanato Aerosil – Analogous Experiments with Insulin Amino aerosil is transformed by reaction with thiophosgene according to eq. (1) to isothiocyanato aerosil 2 (NCS aerosil). Trypsin, cholinesterase, acetylcholinesterase, and insulin are immobilized with NCS aerosil according to eq. (2). The activity of the esterase linked to aerosil is investigated with respect to (a) storage stability, (b) temperature dependence, and (c) pH dependence. The kinetic behavior of the matrix bound enzymes is compared with the corresponding data of the non-immobilized enzymes and of the same enzymes treated with n-butyl isothiocyanate. Cholinesterase as a model enzyme covalently linked with modified aerosil bearing different reactive groups at the end of the spacers, is investigated to understand the influence of the reactive groups on the rate of hydrolysis. In another series of „inverse” experiments, it is shown that acetylcholine analogs covalently linked with aerosil according to eq. (3) are hydrolyzed with different rates using acetylcholine esterase in homogeneous solution. Insulin immobilized with NCS aerosil is pharmacologically inactive after subcutaneous administration. Reduction experiments with immobilized insulin in combination with the determination of SH groups according to Ellman gave no reliable information, whether insulin is linked with the A- or B-chain to the modified aerosil.