6533b860fe1ef96bd12c3446

RESEARCH PRODUCT

Listeria monocytogenes transpeptidāzes Sortāzes A inhibitoru atlase izmantojot uz fluorescences rezonanses enerģijas pārnesi (FRET) bāzētu skrīningu

subject

description

Darba mērķis ir atrast jaunus inhibitorus, kas kavē Listeria monocytogenes transpeptidāzes sortāzes A veikto hidrolīzes reakciju, inhibējot sortāzes A darbību. Šī mērķa sasniegšanai tika izveidota DNS konstrukcija, kas kodē Listeria monocytogenes sortāzes A katalītisko domēnu. Tā kā vislabāk izpētīta ir Staphylococcus aureus sortāze A, papildus tika izveidota tās katalītisko domēnu kodējoša DNS konstrukcija. Ekspresija tika sekmīgi veikta E. coli ekspresijas sistēmā, abi proteīni bija šķīstoši. Sortāzes inhibitori tika atlasīti izmantojot augstas caurlaidības skrīningu, kas tika balstīts uz fluorescences rezonanses enerģijas pārnesi (FRET). 705 potenciālo inhibitoro savienojumu skrīninga rezultātā tika atlasīti 3 savienojumi. Divi no atlasītajiem savienojumiem specifiski inhibē abas sotrāzes, un viens savienojums inhibē L. monocytogenes sortāzi ievērojami spēcīgāk par S. aureus sortāzi. Papildus tika noteikta atlasīto kandidātvielu antibakteriālā iedarbība L. monocytogenes un S. aureus baktērijām, kā arī noteikts vielu citotoksiskums eikariotu šūnām, izmantojot NIH 3T3 peļu embriju fibroblastu šūnas.