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RESEARCH PRODUCT

Entwicklung einer DNA-Polymerase für die direkte m6A-Sequenzierung

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Methoden zur Analyse von RNA-Modifikationen sind essenziell fur das Forschungsfeld der Epitranskriptomik. N6-Methyladenosin (m6A) ist die haufigste Modifikation in der mRNA von Saugetieren und erfullt Funktionen in der Regulation der Genexpression. Techniken zur Detektion dieser Modifikation basieren derzeit auf der Anreicherung von m6A-haltigen RNA-Fragmenten durch Antikorper. Dieser m6A-spezifische Schritt vor der Sequenzierung ist notig, da die Information uber die Modifikation wahrend der reversen Transkription (RT) geloscht wird. Um die Nachteile einer solchen indirekten Detektion zu uberwinden, haben wir uns zum Ziel gesetzt, neue DNA-Polymerasen zu entwickeln, die eine direkte m6A-Sequenzierung ermoglichen. Zu diesem Zweck wurde ein Verfahren etabliert, das die Identifizierung von RT-aktiven KlenTaq-DNA-Polymerase-Varianten mit einer erhohten Fehleinbaurate gegenuber m6A ermoglicht. So konnten m6A-haltige Stellen direkt aus RNA-Sequenzierungsdaten identifiziert werden.