6533b853fe1ef96bd12ac4c8

RESEARCH PRODUCT

Avidiini-HABA-kompleksin karakterisointi ja kontrollointi

subject

description

Avidiini on tetrameerinen proteiini, jota on tutkittu ja käytetty paljon ligandien sitomiskykynsä ansiosta. Avidiinin luonnollinen ligandi on biotiini, jonka affiniteetti avidiiniin on erittäin voimakas (Kd=10-15 M). Avidiini kykenee sitomaan myös muita ligandeja, mutta pienemmällä affiniteetilla. Yksi avidiiniin sitoutuvista molekyyleistä on HABA (4’-hydroksiatsobentseeni-2-karboksyylihappo) -atsoväri, jota on käytetty avidiini-biotiiniteknologiassa hyväksi. HABA-molekyylillä on kaksi eri rakenteellista isomeerimuotoa, trans- ja cis-isomeerit. Yleensä se esiintyy tasomaisena molekyylinä eli trans-isomeerina, mutta se voi menettää tasomaisen rakenteensa ja ilmentyä tällöin cis-isomeerinä. Avidiiniin sitoutuessaan HABA:n väri muuttuu keltaisesta punertavaksi, ja sitoutuminen voidaan havaita spektroskooppisilla menetelmillä absorption muutoksena. Lisäksi useita erilaisia HABA:n johdannaisia on syntesoitu, ja ne sitoutuvat avidiiniin eri affiniteetilla. Tässä työssä määritettiin atsovärimolekyyli HABA:n ja avidiini-HABA -yhdisteiden ominaisuuksia spektro-skooppisilla, kromatografisilla ja kalorimetrisilla menetelmillä. Lisäksi HABA-molekyylin ja yhden sen joh-dannaisen (TAM-017) sitoutumista avidiiniin tutkittiin eri olosuhteissa, kuten eri liuottimissa ja pH-arvoissa. Näiden molekyylien sitoutumista avidiiniin sekä HABA-molekyylin konformaatiota yritettiin myös kontrol-loida valon ja liuoksen pH:n avulla. Tällöin pH:n havaittiin vaikuttavan HABA:n ja avidiinin väliseen vuorovaikutukseen. Mikäli HABA-yhdisteiden konformaatiota ja sitoutumista avidiiniin voidaan kontrolloida jonkun ulkoisen tekijän avulla, HABA-tyyppisiä molekyylejä voitaisiin hyödyntää laajalti eri tieteenaloilla. Tämän tutkimuksen tulosten perusteella pH näyttäisikin olevan käyttökelpoinen parametri HABA:n sitoutumisen kontrolloimiseksi.