Valutazione dei genotipi G6PD nella popolazione Siciliana e identificazione di una nuova variante: “G6PD*Palermo R257M”.

La deficienza enzimatica di G6PDH è uno dei più comuni disordini nella popolazione siciliana in quanto più di 400 milioni di persone ne sono affette. Al fine di valutare la reale prevalenza dei casi nel nostro territorio presentiamo i dati di uno studio di genotipizzazione del locus G6PD (Xq28). 349 soggetti Siciliani di sesso maschile affetti da deficienza di G6PDH sono stati tipizzati secondo varie metodiche. Gli approcci di laboratorio sono: RFLPs (NlaIII, BclI, PstI e BspHI), PCR-Reverse Dot Blot (RDB) ed il sequenziamento diretto del gene. Le prime metodiche sono utili per definire le mutazioni già descritte e comunque le più comuni; il sequenziamento diretto è determinante per la valu…

Profilo delle mutazioni più prevalenti del gene F8 nella popolazione Siciliana: identificazione di una nuova variante

L’Emofilia A, la più comune causa di disordine emorragico nell’uomo, è causata da una grande varietà di mutazioni genetiche nel gene F8 con un ampio range di quadri clinici definiti: forma severa (FaVIIIC G al nucleotide -2 nell’introne 16 (IVS16 -2). Tale mutazione porta verosimilmente ad una alterazione del sito di splicing e non essendo presente nei due genitori è da ritenersi una mutazione de novo.

"Sicilian haemophilia a and b registry comprising phenotypic and genotypic data"

Sindrome di Feingold da delezione 2p24

Q289P mutation in the FGFR2 gene: first report in a patient with type 1 Pfeiffer syndrome.

When normal development and growth of the calvarial sutures is disrupted, craniosynostosis (premature calvarial suture fusion) may result. Classical craniosynostosis syndromes are autosomal dominant traits and include Apert, Pfeiffer, Crouzon, Jackson-Weiss, and Saethre-Chotzen syndromes. In these conditions, there is premature fusion of skull bones leading to an abnormal head shape, ocular hypertelorism with proptosis, and midface hypoplasia. It is known that mutations in the fibroblast growth factor receptors 1, 2, and 3 cause craniosynostosis. We report on a child with a clinically diagnosed Pfeiffer syndrome that shows the missense point mutation Q289P in exon 8 of the FGFR2 gene. This …

DEVELOPMENT OF S/MAR MINICIRLES VECTOR FOR PERSISTENT EXPRESSION IN VIVO.

An ideal vector for gene therapy must fulfil the following requirements: non-toxicity, mitotic stability and persistent therapeutic levels of transgene expression. Viral vectors are widely used due to their ability to sustain prolonged expression. Their potentially tumorigenic effects are a limiting factor for in vivo applications. Non-viral vectors, which can be designed to be free from viral sequences, are a promising alternative for gene transfer although they often produce transient transgene expression. This limitation of this vector type is primarily due to bacterial sequences they contain and these have proven to be toxic for the mammalian cells as they contain a high number of unmet…

Un vettore NON-virale contenente un elemento S-MAR (Scafold/Matrix Attachment)consente un'espressione persistente nel tessuto epatico nel modello murino.

Un vettore ideale dovrebbe consentire l'espressione di un transgene senza alcuna limitazione di sicurezza e di riproducibilità. Qui riportiamo lo sviluppo di un nuovo vettore NON-virale basato su DNA episomale plasmidico (pDNA) che sembra soddisfare al pieno le caratteristiche del vettore ideale nel tessuto epatico. Questo pDNA deriva dalla combinazione tra un promotore epatospecifico (AAT promoter) posto a monte del transgene e un elemento S-MAR (Scafold/Matrix Attachment) posto a valle, mentre il reporter è gene della luciferasi. L'applicazione nel tessuto epatico è stata effettuata mediante iniezione ad alta pressione per via vena caudale del modello murino (hydrodynamic delivery). L'esp…

Evaluation of serum CA 125 levels in patients with pelvic pain related to endometriosis.

The aim of the study was to investigate the clinical value of the serum CA 125 level for diagnosing and determining the severity of endometriosis and pelvic pain associated with endometriosis. Eighty-six women who underwent operative laparoscopy were enrolled. Sixty-nine women with endometriosis and 17 without endometriosis participated in this study. In all of the patients, endometriosis was diagnosed and classified into stages according to the Revised American Fertility Society (R-AFS) classification. The mean serum CA 125 levels were determined in each patient. We also investigated the relationship between serum CA 125 concentration and the intensity of dysmenorrhea and dyspareunia in t…

Glucose 6-phosphate dehydrogenase Palermo R257M: a novel variant associated with chronic non-spherocytic haemolytic anaemia

Development of S/MAR plasmid vector for persistent expression and maintenance in vivo

An ideal gene therapy vector should enable persistent transgene expression without limitations of safety and reproducibility. Here we report the development of a non-viral episomal plasmid DNA (pDNA) vector that appears to fulfil these criteria. This pDNA vector combines a scaffold/matrix attachment region (S/MAR) with a human liver-specific promoter (a1-antitrypsin (AAT)) in such a way that long-term expression is enabled in murine liver following hydrodynamic injection. Long-term expression is demonstrated by monitoring the longitudinal luciferase expression profile for up to 6 months by means of in situ bioluminescent imaging. We conclude that the combination of a mammalian, tissue-speci…

Clinical Utility of a Unique Genome-Wide DNA Methylation Signature for KMT2A-Related Syndrome

Wiedemann–Steiner syndrome (WDSTS) is a Mendelian syndromic intellectual disability (ID) condition associated with hypertrichosis cubiti, short stature, and characteristic facies caused by pathogenic variants in the KMT2A gene. Clinical features can be inconclusive in mild and unusual WDSTS presentations with variable ID (mild to severe), facies (typical or not) and other associated malformations (bone, cerebral, renal, cardiac and ophthalmological anomalies). Interpretation and classification of rare KMT2A variants can be challenging. A genome-wide DNA methylation episignature for KMT2A-related syndrome could allow functional classification of variants and provide insights into the pathoph…

Gene symbol: f9.

La trombofilia ereditaria e le complicanze gravidiche nella popolazione siciliana.

Una nuova mutazione nell’esone 4 del gene del FVIII causa un quadro di emofilia moderata.

INTRODUZIONE. L’emofilia su scala mondiale rappresenta la più comune diatesi emorragica X linked. In Sicilia circa 140 famiglie sono soggette a tale condizione. Clinicamente l’emofilia è distinta in forma severa, moderata e lieve in base all’attività del fattore VIII (F8). La forma grave dell’emofilia A è caratterizzata dalla assenza di fattore VIII plasmatico e dall’attività del fattore VIII plasmatico < 1% ed è causata per il 50 % dalla inversione dell’introne 22 del gene del fattore VIII e per il 5% dalla inversione dell’introne 1. La restante parte di alterazioni genetiche riguarda numerose mutazioni puntiformi tipo missense, non-sense e frameshift. La forma moderata è dovuta più freque…

Associazione dei polimorfismi dei geni INF-γ ed IL-10 con la suscettibilità alla Febbre bottonosa.

Novel human pathological mutations. Gene symbol: F8. Disease: Haemophilia A

Indagini genetiche e trattamenti prenatali in utero della Sindrome Adreno Genitale (SAG) in una Coorte Siciliana.

La deficienza dell'enzima 21 idrossilasi (21OHD) è la causa più comune di sindrome adrenogenitale (SAG). Il gene implicato è il CYP21 (6p21.3). La SAG è un problema clinico-sociale in quanto nel 95% dei casi genera l'iperandrogenismo dei neonati di sesso femminile. Il trattamento più effettuato in corso di virilizzazzione dei genitali femminili esterni è di tipo chirurgico (genitoplastica). Il trattamento prenatale in utero è una alternativa medica con il fine di compensare il difetto enzimatico e prevenire l'eccesso di androgeni in corso di morfogenesi fetale. Un nuovo protocollo diagnostico-terapeutico prenatale è stato sviluppato sulla base di una terapia precoce (alla 5° WG) con Desamet…

Un nuovo caso di microdelezione 15qter: valutazioni cliniche, genetiche e molecolari

Per una migliore comprensione patogenetica del ritardo mentale (RM) in combinazione o meno con le manifestazioni malformative, i tests di laboratorio sono di notevole importanza. La metodica CGH Array ha migliorato la sensibilità nella valutazione dei punti di rottura nelle delezioni cromosomiche. Qui presentiamo un caso di delezione 15q26.2-15qter in un bambina con medie note dismorfiche esterne (come la clinodattilia), interne (doppio distretto renale a destra) ed alcune alterazioni del linguaggio. L'analisi GCH Microarray è stata effettuata estraendo da linfociti di sangue periferico (Puregene DNA isolation kit, Gentra) e marcando (Cy5) il DNA del probando e realizzando l'Array CGH (Agil…

Development of S/MAR minicircles for enhanced and persistent transgene expression in the mouse liver.

We have previously described the development of a scaffold/matrix attachment region (S/MAR) episomal vector system for in vivo application and demonstrated its utility to sustain transgene expression in the mouse liver for at least 6 months following a single administration. Subsequently, we observed that transgene expression is sustained for the lifetime of the animal. The level of expression, however, does drop appreciably over time. We hypothesised that by eliminating the bacterial components in our vectors, we could improve their performance since bacterial sequences have been shown to be responsible for the immunotoxicity of the vector and the silencing of its expression when applied i…

Epidemiologia Della Sordità Geneticamente Trasmessa Nella Popolazione Siciliana

Riarrangiamento cromosomico subtelomerico Del 10Q25: descrizione di un caso con elevata espressività clinica.

Epidemiological study of nonsyndromic hearing loss in Sicilian newborns

Deafness is caused by a variety of facts, genetic and environmental. Regarding the acquired causes, deafness can be the consequence of prenatal infections, acoustic or cerebral trauma, and the use of ototoxic drugs. Deafness can be the only manifestation (nonsyndromic forms) or it may occur together with other phenotypic findings (syndromic forms). The majority of nonsyndromicdeafness has a genetic basis [Van Camp et al., 1997]. In recent years, deafness and hearing loss have assumed a clinical importance in the study of congenital disorders [Morton et al., 1991]. The clinical interest for hearing loss is supported by the social impact that this disorder has; if not treated, delays in the d…

Sindrome di di Crigler-Najjar tipo 2: due nuove mutazioni missense nel gene UGT1A1.

La sindrome di Crigler-Najjar (CNS) è una malattia molto rara (prevalenza 1/1.000.000 nati) a trasmissione autosomica recessiva, caratterizzata da un incremento cronico e grave di bilirubina sierica indiretta (non coniugata), dovuta alla parziale (tipo 2) o completa (tipo 1) assenza funzionale dell’enzima epatico glucoronosil transferasi UGT1. La malattia si manifesta in età neonatale con un ittero precoce e intenso, dovuto alla presenza di bilirubina non coniugata e l'esame fisico è nella norma; in epoca di sviluppo gli effetti clinici della CNS tipo 1 sono letali in quanto l’eccesso di bilirubina porta inevitabilmente ad una encefalopatia essendo tale pigmento fortemente liposolubile. Le …

Case report: Novel compound heterozygosity for pathogenic variants in MED23 in a syndromic patient with postnatal microcephaly

Biallelic loss-of-function variants in MED23 cause a recessive syndromic intellectual disability condition with or without epilepsy (MRT18). Due to the small number of reported individuals, the clinical phenotype of the disorder has not been fully delineated yet, and the spectrum and frequency of neurologic features have not been fully characterized. Here, we report a 5-year-old girl with compound heterozygous for two additional MED23 variants. Besides global developmental delay, axial hypotonia and peripheral increased muscular tone, absent speech, and generalized tonic seizures, which fit well MRT18, the occurrence of postnatal progressive microcephaly has been here documented. A retrospe…

Epidemiologia della sordità geneticamente trasmessa nella popolazione siciliana

Refractory Acne and 21-Hydroxylase Deficiency in a Selected Group of Female Patients.

&lt;i&gt;Background:&lt;/i&gt; Excessive androgen production, suspected in women when acne is accompanied by hirsutism and menstrual irregularities, may be due to congenital adrenal hyperplasia. This inherited disorder of cortisol biosynthesis is caused in more than 90–95% of all cases by 21-hydroxylase deficiency (21-OHD). The steroid 21-hydroxylase gene &lt;i&gt;(CYP21)&lt;/i&gt; has a high degree of variability. &lt;i&gt;Objective:&lt;/i&gt; This study was conducted to evaluate &lt;i&gt;CYP21 &lt;/i&gt;gene mutations in a selected group of women with papulopustular and comedonal acne refractory to treatment, irregular menses and hirsutism. &lt;i&gt;Methods:&lt;/i&gt; 30 out of 61 women e…

A novel nonsense mutation in exon 2 of the factor IX gene resulting in severe haemophilia B

Clinical and hormonal characteristics in heterozygote carriers of congenital adrenal hyperplasia

Abstract Non-classical congenital adrenal hyperplasia (NC-CAH) includes a group of genetic disorders due to a broad class of CYP21A2 variants identifying a disease-causing ‘C’ genotype. The heterozygous carriers of CYP21 mutations are at increased risk of developing clinically evident hyperandrogenism, even though clinical and laboratory characteristics are still underestimated. With the aim of obtaining a more accurate delineation of the phenotype of heterozygous carrier of CAH, we analyzed clinical, biochemical and molecular characteristics in a cohort of Sicilian subjects. Fifty-seven females with biallelic and monoallelic CYP21A2 variants classifying NC-CAH (24) and heterozygous carrier…

Development of a new S/MAR containing Minicircle DNA vector: a new promise for Gene Therapy.

A barrier limiting the use of nonviral vectors for gene therapy is related to the short duration of transgene expression in vivo. Development, evaluation, and optimisation of a long term transgene expression using a non viral vector is currently the primary aim in our research field. Recently, we have demonstrate that a nonviral episomal plasmid (pDNA) vector combined with a scaffold/matrix attachment region (S/MAR) is able to sustain long-term expression in murine liver for at least six months following hydrodynamic injection. However, plasmids contain sequences, which are essential for propagation in bacteria but are unnecessary for expression in mammalian cells. These bacterial component…

Una Combinazione di Due Mutazioni Recessive nel Gene della Connexina 26 causa un quadro di Sordità Neurosensoriale Non Sindromica.

La sordità geneticamente trasmessa ha assunto nell’ultimo decennio una rilevanza clinica per l’elevata frequenza dei probandi (circa 1 su 1000 nati vivi) e la cospicua prevalenza dei portatori sani (1 su 34). Nel presente studio abbiamo analizzato il gene GjB2 (connexina 26) di un bambino maschio siciliano con una sordità bilaterale (DFNB). Il gene connexina 26 del propositus, presenta due mutazioni (M34T e L90P) ognuna delle quali poste negli alleli omologhi. La combinazione di tali mutazioni genera una alterata funzione del fenotipo connexina 26, pertanto si spiega la comparsa della malattia nel propositus.

Persistent episomal transgene expression in liver following delivery of a scaffold/matrix attachment region containing non-viral vector

An ideal gene therapy vector should enable persistent transgene expression without limitations of safety and reproducibility. Here we report the development of a non-viral episomal plasmid DNA (pDNA) vector that appears to fulfil these criteria. This pDNA vector combines a scaffold/matrix attachment region (S/MAR) with a human liver-specific promoter (alpha1-antitrypsin (AAT)) in such a way that long-term expression is enabled in murine liver following hydrodynamic injection. Long-term expression is demonstrated by monitoring the longitudinal luciferase expression profile for up to 6 months by means of in situ bioluminescent imaging. All relevant control pDNA constructs expressing luciferas…

Vitiligo susceptibility and catalase gene (CAT) polymorphisms in sicilian population

BACKGROUND Catalase gene (CAT) polymorphisms were analyzed as responsible for the deficiency of catalase enzyme activity and concomitant accumulation of excessive hydrogen peroxide in vitiligo patients. Catalase is a well-known oxidative stress regulator that could play an important role in the pathogenesis of vitiligo. This study was conducted to evaluate three CAT gene polymorphisms (-89A/T, 389C/T, 419C/T) and their association with vitiligo susceptibility in Sicilian population. METHODS Sixty out of 73 Sicilian patients with vitiligo were enrolled and submitted to CAT gene analysis. RESULTS Contrary to the Northern part of Europe but likewise to the Mediterranean area, the frequency of …

MTHFR C677T homozygous as risk factor for complications after OLT for cryptogenic cirrhosis

Trombofilia ereditaria e complicanze gravidiche nella popolazione siciliana

Trombofilia ereditaria e complicanze gravidiche nella popolazione siciliana. È ormai noto che la trombofilia congenita rappresen- ti un fattore di rischio per la gravidanza. Può infatti es- sere causa di abortività ricorrente, perdita fetale (MEF), ritardo di crescita fetale (IUGR) e altri problemi nel mantenimento della gravidanza (preeclampsia e di- stacco di placenta). Nel presente studio è stata indaga- ta la prevalenza dei fattori trombofilici nella popolazio- ne siciliana e la possibile relazione fra essi ed un even- to trombotico uteroplacentare in gravidanza. Sono sta- ti comparati due gruppi di gestanti con anamnesi posi- tiva per presenza di almeno un fattore trombofilico e storia…

Prevalenza delle mutazioni in GJB2 nella popolazione siciliana affetta da sordità neurosensoriale.

A large view of CYP21 locus among Sicilians and other Populations: identification of a novel CYP21A2 variant in Sicily.

Background. Several mutations in CYP21 locus cause 21-Hydroxylase Deficiency (21-OHD). The most common mutations are widespread among the different geographic areas and their frequencies have been also reported to differ among certain populations. Aim. To obtain a large view on the frequencies of the most common mutations in the CYP21 locus, in Sicily, in Mediterranean and in other major geographic areas in the worldwide. Subjects and Methods. 308 unrelated CYP21A2 alleles leading 21-OHD in Sicily were genetically typed and compared with other series previously reported in Sicily and in surrounding regions. An analysis of the frequencies of the different geographic areas was also carried ou…

Identification of two new mutations in TRPS 1 gene leading to the tricho-rhino-phalangeal syndrome type I and III.