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RESEARCH PRODUCT

Phosphororganische Verbindungen, 113. Chemoselektive gesteuerte Fluoreszenzmarkierung von α-Chymotrypsin

subject

description

α-Chymotrypsin wird durch die fluoreszierenden Phosphonoylfluoride 1 und 3 inhibiert. Die fluoreszenzmarkierten α-Chymotrypsine 5 und 6 wurden gelelektrophoretisch aufgetrennt. Die Fluoreszenz von 1 und 3 sowie 5 und 6 ist komplementar losungsmittelabhangig. Mit 3 fluoreszenzmarkiertes α-Chymotrypsin ergibt bei der sauren Hydrolyse den fluoreszierenden Serinester 7. Durch reduktive Offnung der SS-Brucken im fluoreszenzmarkierten 6 wird bewiesen, das 1 mit einem Serin der C-Kette reagiert hat. Das gleiche Ergebnis erhalt man, wenn man in 6 die durch Reduktion freigesetzten SH-Gruppen zunachst mit Vinylsulfonen blockiert und dann auftrennt. Organophosphorus Compounds, 113. — Chemoselectively Controlled Fluorescence Labelling of α-Chymotrypsin α-Chymotrypsin is inhibited by the fluorescent phosphonoyl fluorides 1 and 3. The fluorescence-labelled enzymes 5 and 6 were separated by gel electrophoresis. The fluorescence of 1 and 3 as well as 5 and 6 is complementary with respect to the solvent dependence. α-Chymotrypsin labelled with 3 is cleaved by acid forming the fluorescent serine ester 7. Reductive opening of the SS bridges in fluorescent 6 proves that the fluorescent phosphonoyl fluoride 1 has reacted with a serine in the C chain. The SH-selective vinyl sulfones also block SH functions obtained from 6 by reduction. Only the C chain modified by vinyl sulfone is fluorescent.