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RESEARCH PRODUCT

Über ein verfahren zur exakten bestimmung der sedimentationskonstanten ungereinigter enzyme mit hilfe des aktivitätstestes. versuche an den glukosedehydrogenasen aus penicillium notatum (notatin) und aspergillus niger

subject

description

In einer normalen Ultrazentrifugenzelle wird ein Bodenbelag aus Filtrierpapier angebracht, in welchen das Enzym hineinsedimentiert. Aus dem Aktivitatsverlust oberhalb des Bodenbelags wird die Sedimentationskonstante berechnet. Durchfuhrung und Auswertung der Versuche werden zu einer Routinemethode ausgearbeitet. Die Methode wird dazu benutzt, die Sedimentationskonstanten der beiden Glukosedehydrogenasen aus Penicillium notatum bzw. Aspergillus niger zu bestimmen. Es ergibt sich 7,91 bzw. 8,81 SVEDBERG. Die nach dem fruher beschriebenen Aktivitatstest bestimmten Diffusionskonstanten sind 5,56 bzw. 4,47 · 10−7 cm2·sec−1. Daraus ergeben sich die Molekulargewichte 138 000 bzw. 192000 und die Reibungsverhaltnisse 1,11 bzw. 1,24. On the bottom of a normal ultracentrifuge cell was placed a layer of filter paper into which the enzyme sediments. The sedimentation constant was calculated from the loss of activity above the filter paper. The execution and evaluation of the experiments were developed to a routine method. The method was used to determine the sedimentation constants of glucosedehydrogenase from Penicillium notatum and from Aspergillus niger. These were found to be 7,91 and 8,81 SVEDBERG units respectively. When combined with the previously determined diffusion constants 5,56 and 4,47 · 10−7 cm2·sec−1, one obtains molecular weights of 138,000 and 192,000, and friction ratios of 1,11 and 1,24 respectively.